- 2021-10-23 08:00:00
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近日，武汉亚星yaxin868百家乐制药有限公司（以下简称“亚星yaxin868百家乐”）分析与质控团队完成了报告基因法检测CD38×CD3双特异抗体生物学活性的研究,其研究论文 “Development of a Reporter Gene Method to Measure the Bioactivity of Anti-CD38×CD3 Bispecific Antibody” 发表于Antibody Therapeutics期刊上。
亚星yaxin868百家乐自主研发的抗CD38×CD3双抗体（Y150）是基于YBODY®平台技术开发的非对称性双特异性抗体。体内外研究表明，Y150能激活T细胞，并有效杀伤表达CD38的肿瘤细胞。在双抗的开发过程中，建立一种能反映双抗体作用机制（MOA）的细胞生物学活性评价方法非常重要。基于细胞毒性的检测方法如CCK-8，MTS，MTT，LDH等，可以以外周血单核细胞（PBMC）或T细胞和细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）为效应细胞，直接检测对肿瘤细胞的杀伤作用，但由于这些效应细胞难以获取，且存在较大的个体差异，因此不适合作为双抗生物学活性的评价方法。
近年来，基于细胞水平的报告基因法广泛应用于检测单克隆抗体和双抗的生物学活性。检测以CD3为靶点的双抗时，双抗一端与肿瘤细胞相关的靶点结合，另一端与工程改造的Jurkat T细胞上的CD3结合，激活T细胞反应元件（NFAT-RE）介导表达的萤光素酶，与外加的萤光素酶底物反应，其化学发光强度可定量检测双抗的生物学活性（图1）。
图1 报告基因法检测CD3靶点双抗生物学活性
当采用报告基因法检测Y150的生物学活性时，由于Jurkat T细胞上同时表达CD38和CD3，在没有肿瘤细胞存在的条件下，两个Jurkat T细胞会通过双抗的连接而自我激活，产生非特异性信号，从而干扰实验（图2，绿色）。利用CRISPR-Cas9技术敲除Jurkat T细胞上CD38的表达，并构建稳定的单克隆细胞株进行Y150生物学活性检测（图2，蓝色），成功消除了非特异性信号（图2，棕色）。该方法操作简便，检测时间周期较短，分析方法验证结果表明该方法在50%-200%范围内具有良好的准确度、精密度、线性，以及稳健性（表1），可用于抗CD38×CD3双抗体的QC放行检测和稳定性研究。
图2 Y150报告基因法检测Y150生物学活性方法建立
表1 报告基因法检测Y150生物学活性方法学验证结果
在Y150的高温稳定性研究中，报告基因法、细胞杀伤法和ELISA法测定的结果与CEX-HPLC法测定的电荷异质体之间存在高度相关性，生物学活性或相对结合活性的降低与酸性电荷异质体的增加呈线性相关，且这三种活性检测法测定的相对效价变化趋势一致（图3），进一步说明本研究建立的报告基因检测可以反映Y150的作用机制，能反应T-细胞招募类双抗体双靶点的协同效应，用于其生物学活性的评估及质量控制。
图3 三种活性检测方法相关性研究结果
关于亚星yaxin868百家乐制药
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武汉亚星yaxin868百家乐制药有限公司是一家专门从事以免疫和靶向疗法为核心的生物制药公司，专注于双特异性抗体药物的研发与产业化。双特异性抗体药物是下一代抗体药物的核心研方向，在肿瘤、免疫、炎症、心血管和感染等重大疾病领域具有广泛的治疗前景。亚星yaxin868百家乐制药基于自主创新的双抗(YBODY®, CHECKBODY™ 等）、纳米抗体、4价多抗、Fc优化等平台技术，已成功开发出一系列分子和机制创新、工艺先进、质量稳定的双抗产品，多个产品获得国家科技部“十二五”、“十三五”重大新药创制专项支持，已有4个双抗一类新药获得中国CDE和美国FDA临床试验许可，目前正在进行临床I/II期的评估和临床开发。围绕核心技术与产品，公司已申请发明专利64项，获得授权28项（其中国外授权专利8项）。亚星yaxin868百家乐以“溯源生命、解密肿瘤”为使命，以创新开发为核心，建立了完善的国际化研发团队，将持续扩大创新技术和产品开发的深度和速度，为保人民的健康提供未满足的临床新药。
